任文静1 田军2  殷献宝1 陈琪3 吴桂聊3 孙静3

（1.山东潍坊医学院耳鼻喉科教研室；

2.山东潍坊市人民医院耳鼻喉科;

3.山东潍坊医学院耳鼻喉科教研室 

摘要：目的 探讨过敏性鼻炎患者组织中白细胞介素-17A（Interleukin17A,IL-17A）和白介素-23（Interleukin23,IL-23）的表达及临床意义。方法  收集2009年1月至2011年1月潍坊市人民医院耳鼻喉科鼻中隔偏曲伴过敏性鼻炎而行鼻中隔矫正术、下鼻甲部分切除术患者为观察组，对无变应性鼻炎病史而行下鼻甲切除术患者为对照组，收集上述患者的组织采用免疫组化染色法，检测两组组织中IL-17A 和IL-23的表达情况。结果 过敏性鼻炎患者局部组织中阳性率77.5%,IL-23阳性率72.5%,与对照组相比,差异均有统计学意义( P 均<0.05),其局部组织内IL-17A和IL-23表达情况呈正相关( r= 0.339, P＜0.05), 结论 IL-17A 和IL-23参与了变应性鼻炎的发病,二者在过敏性鼻炎中发挥了协同作用。

关键字：IL-17A  IL-23  过敏性鼻炎  免疫组织化学法

 Abstract:Objective  to Investigate expression and clinical significance.

Of IL-17A and IL-23 inPatients with allergic rhinitis tissue. Methods Collected from January 2009 to January 2011, Weifang People's Hospital ENT Septoplasty line with allergic rhinitis and nasal surgery, partial resection of the inferior turbinate of patients in the observation group, a history of allergic rhinitis and non-line turbinate resection for the control group, to collect the patient's tissue using immunohistochemical staining, tissues were detected IL-17A and IL-23 expression. Results：Local tissue in patients with allergic rhinitis, the positive rate of 77.5%, IL-23 positive rate of 72.5%, compared with the control group, the differences were statistically significant (P <0.05), the local tissue IL-17A and IL-23 expression was positively correlated (r = 0.339, P <0.05). Conclusion  IL-17A and IL-23 involved in the pathogenesis of allergic rhinitis, allergic rhinitis in both play a synergistic role.

Key words  IL-17A IL-23  allergic rhinitis；Immunohistochemistry

过敏性鼻炎是常见的过敏性疾病，机体由于受到各种变应原的刺激作用, 激活体内嗜酸性粒细胞、肥大细胞和T淋巴细胞等多种细胞, 使其产生多种炎性细胞因子,参与疾病的发生、发展和转归等过程,而在此过程中,细胞因子水平直接反应了机体的免疫功能情况, 其水平的高低不但反应了体内T淋巴细胞的发育状态, 而且也反应了T淋巴细胞对B细胞的调节功能。

      过敏性鼻炎是多种炎性细胞和炎症因子相互作用而形成的慢性呼吸道炎症性疾病。最近研究发现，白细胞介素-17A（IL-17A）在过敏性鼻炎中的表达和IL-23表达相关性的研究鲜见报道。本实验研究采用免疫组织化学对过敏性鼻炎及正常粘膜组织中IL-17A和IL-23的表达情况进行了研究，以探讨IL-17A和IL-23在过敏性鼻炎发生发展中的关系，以期对临床工作有一定的指导意义。

1 资料与方法

1．1病例选择及分组  

选择2009年1月至2011年1月潍坊市人民医院因鼻中隔偏曲伴变应性鼻炎而行鼻中隔矫正术、下鼻甲部分切除术患者40例观察组，其中男29例，女11例，年龄19~37岁，平均年龄23.4岁,取无变应性鼻炎病史而行下鼻甲切除标本20例作为对照组，其中男27例,女13例,年龄在23~40岁,平均年龄27.6岁,过敏性鼻炎的诊断符合中华医学会耳鼻咽喉科学分会变应性鼻炎诊断标准[1]，以上观察组患者2周前无全身或鼻腔局部使用过糖皮质激素、免疫抑制剂、抗组胺药及抗生素类药物，对照组为行变应原皮试无阳性变应原的患者。

1．2主要试剂

采用北京奥搏森生物技术有限公司兔抗人IL-17A单克隆抗体和IL-23，免疫组化染色试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司，1。1.3免疫组织化学法

将手术切除术标本迅速放入10%中性缓冲福尔马林液中充分固定，采用0.01 mol/L 柠檬酸盐缓冲液抗原修复，高压锅热修复。IL-17A 抗体浓度为1:100，4 ℃湿盒孵育48 h。DAB 显色，苏木精对比染色，梯度乙醇脱水，二甲苯透明后封片。空白对照以PBS 代替一抗。结果判定：以胞质出现黄色、棕黄色颗粒或染色者为阳性,阴性对照不着色， 在高倍镜(×400) 下随机选取5 个视野计数阳性表达细胞所占比例，取其平均数求其阳性百分率作为结果。 

1.4 统计学处理

应用SPSS17.0 统计软件进行分析，不同组间蛋白表达差异采用 检验和方差分析, Spearman相关分析IL-17A和IL-23的相关性。P<0.05 表示差异有统计学意义

2 结果

2．1 IL-17A、IL-23在过敏性鼻炎、正常组织中的表达

   40例过敏性鼻炎患者组织中，有31例IL-17A蛋白呈阳性表达，其阳性表达率为77.5%；而对照组的20例正常粘膜组织，仅1例呈阳性表达。IL-17A蛋白在过敏性鼻炎组织中阳性表达显著高于对照组粘膜组织（P＜0.05）。IL-23蛋白在过敏性鼻炎患者组织及对照组粘膜组织阳性表达率分别为72.5%、0%，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2  IL-17A和IL-23在过敏性鼻粘膜组织中表达的关系

31例IL-17A表达阳性的鼻粘膜组织中有25例IL-23表达阳性，9例IL-17A表达阴性的鼻粘膜组织中4例IL-23表达阳性。经统计学处理：IL-17A与IL-23在鼻粘膜组织中表达呈正相关（r=0.339,P＜0.05）

3讨论

IL-23是Oppmann等于2000年发现的一个白介素-12（IL-12）细胞因子家族的新成员[2]，它与IL-12一样，都是含有亚单位p40的异源二聚体细胞因子，它们的功能部分重叠而又彼此有所不同[3.4]。IL-23是一个由亚单位p19和p40通过二硫健形成的异源二聚体分子，结构为主要作为一种前炎症细胞因子，主要由活化的树突细胞和巨噬细胞分泌，IL-23能促进IFN-γ的产生和T细胞的增殖，具有较强的抗肿瘤活性和抗感染免疫保护功能。本实验通过免疫组化方法检测40例过敏性鼻炎中IL-23的表达，结果显示：IL-23在过敏性鼻炎粘膜组织中高表达，而在正常鼻粘膜组织及血液中极低表达或不表达，表明IL-23与过敏性鼻炎有一定的关系，可能参与了过敏性鼻为的发生。

IL-17A 由 Rouvier 等[5]在 1993 年首次描述，并命名为 CTLA8，之后更名为IL-17，常称为 IL-17A。IL17A 基因位于 6 号染色体的 12 短臂上。IL-17A 属于IL-17 家族成员，是一类二硫化物连接的同源糖蛋白，有 155 个氨基酸组成。人类的 IL-17A 和鼠类的 IL-17A 具有显著相似同源性，都含有多个非常保守的糖基化位点

[6]。关于IL-17A 在过敏性鼻炎发病中的作用是我们关心的问题。Shibata 等[7]应用 PCR-SSCP 检测的方法在 287 例胃癌病人和 524 例健康对照中探讨了 IL-17A 与日本人群胃癌易感性的关系。Th17细胞介导的炎症免疫是人体免疫系统的重要组成部分。IL-17A作为Th17细胞的主要分泌产物，在抵抗外来病原和自身组织免疫致病过程中起着重要的作用[8]。然而也有研究发现IL-17A同样具有抑制肿瘤的作用。小鼠模型显示IL-17A可以增加毒性T淋巴细胞的活性，抑制造血系统肿瘤的生长。已有研究表明，IL-17A 是T 细胞诱导的炎症反应的早期启动因素，对炎症细胞有强大的化学趋化作用， 可以显著增加呼吸道内炎症细胞募集、活化［9,10］。IL-17A 还能激活成纤维细胞、巨噬细胞和上皮细胞释放VEGF、TGF-β、GM-CSF、TNF-α、PGE2、IL-1、IL-6、IL-8 等，这些细胞因子不仅促进肿瘤血管生成，加速肿瘤生长转移[19]而且促进气道炎症的进一步加剧，还参与了气道的重构［12.13］。而呼吸道炎症和呼吸道重构是过敏性鼻炎的两个主要病理特征。我们的实验结果显示：IL-17A在过敏性鼻炎组织中过度表达，而在正常组织中无表达或低表达，提示IL-17A参于了过敏性鼻炎疾病的发展。最近国外研究表明，普伐他汀能够减轻过敏性的气道炎症，其中一个机制就是跟普伐他汀抑制IL-17A 的产生有关［14］，说明可以通过抑制或者调节或者抑制这些蛋白质的功能，在炎症反应的上游进行阻断，达到控制过敏性鼻炎的发作，从而对过敏性鼻炎起治疗性的应用。

过敏性鼻炎是一个复杂的免疫性疾病，众多的细胞因子和炎症介质参与发病过程. 大量动物实验证实促炎细胞因子对维持慢性炎症，促进肿瘤细胞生成，肿瘤微环境扩张以及抑制肿瘤免疫监视等具有重要作用[15]。这些炎症调节因子决定了炎症的性质和严重程度. 近年来发现的 IL-23、IL-17A 以及 TNF-α等参与调节的 Th17 细胞免疫在炎症免疫过程中的重要作用越来越为人们所关注。本研究中发现,

31 例IL-17A 蛋白阳性表达的过敏性鼻炎组织中, IL-23蛋白的阳性表达的有25 例, 阳性表达率为80.6% ; 9 例IL-17A蛋白表达隐性的过敏性鼻炎组织中,IL-23 蛋白表达阴性的有5 例。经统计学分析, 两者呈显著性正相关( r =0.339, P<0.05) 。提示IL-17A与IL-23在过敏性鼻炎的发生发展中可能有一定的协同作用。

    综上所述, IL-17A的高表达在过敏性鼻炎的发生、发展中起一定作用, 而IL-23的高表达提示其参与了过敏性鼻炎的发生。IL-17A与IL-23在过敏性鼻炎病变中起协同作用。

参考文献:

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[6] Davidson,T.S., R.J. DiPaolo, J. Andersson, and E.M. Shevach, Cutting Edge:IL-2 is essential for TGF-beta-mediated induction of Foxp3+ T regulatory cells. J Immunol, 2007. 178(7): p. 4022-6.

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[8] Awasthi, A. and V.K. Kuchroo, Th17 cells: from precursors to players in inflammation and infection. Int Immunol, 2009. 21(5): p. 489-98.

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［10］ Liang SC, Long AJ, Bennett F, et al. An IL-17F/A heterodimer protein is produced by mouse Th17 cells and induces airway  neutrophil recruitment［J］. J Immunol, 2007, 179(11): 7791-9.

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［14］ Imamura M, Okunishi K, Ohtsu H, et al. Pravastatin attenuates allergic airway inflammation by suppressing antigen-sensitization, IL-17 production, and antigen-presentation in the lung［J］.Thorax, 2008,

［Epub ahead of print］。

[15] Bettelli, E., Y. Carrier, W. Gao, T. Korn, et al., Reciprocal developmental pathways for the generation of pathogenic effector TH17 and regulatory T cells.Nature, 2006. 441(7090): p. 235-8.