张峰¹，梁艳

1.开封市食品药品检验所 2.河南省医药学校 

【摘要】目的   建立高效液相色谱法测定小儿感冒口服液中靛玉红的含量。方法 Agela Promosil C18(250 mm×4.6mm,5μm)分析柱,流动相为甲醇-水-冰醋酸(74:25：1),流速为1.0mL·min-1,检测波长为290 nm。结果 靛玉红与其他组分分离良好,其回归方程为: Y = 13452 X +3453 ,线性范围为0.02525μg～0.2525μg,相关系数r=0.9999,平均加样回收率为99.38％(RSD=0.2％)。结论：本法简便、准确可靠,可用于该药的质量控制。

【关键词】 ：高效液相色谱; 小儿感冒口服液; 靛玉红

 【Abstract】:Objective:To establish the method of determination of indirubin from  Xiaoerganmao oral liquid.Methods: HPLC was employed,  which  chromatographic column was  Agela Promosil C18 (4.6 mm×250 mm), mobile phase was Methanol-water - Acetic acid  (74:25:1) , flow rate was 1.0mL·min-1, detection wavelength was 290 nm . Results ：A good linear correlationship was obtained  when indirubin content ranged from 0.02525μg  to 0.2525μg(r=0.999 9), the average recovery was 99.38%(RSD = 0.2%) . Conclusion The method is simple, fast, effective, sensitive, accurate with good repeatability and recovery

【Key words】: High-performance liquid chromatography; xiaoerganmao oral liquid;  Indirubin

小儿感冒口服液是由大青叶、板蓝根、连翘、地黄等10味中药组成的复方制剂，清热解表。用于风热感冒，发热重，恶寒轻，汗出而热不解，头痛鼻塞，咳嗽，口渴咽红。其中大青叶和板蓝根中都含有靛玉红，《中国药典》2010年版^[1]中未收载靛玉红的含量测定，为了提高药品质量，选择靛玉红作为质量控制的定量指标，用高效液相色谱法对其进行了测定含量。

1  仪器与试药

1.1   仪器高效液相色谱仪岛津LC-2010C：Sartorias电子天平（CD-225D）；

1.2 靛玉红（110717-200204 )，中国药品生物制品检定所提供

小儿感冒口服液为市售品; 

试药甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。

2  方法与结果

2.1  色谱条件  色谱柱：Agela Promosil C18 (4.6 mm×100 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水-冰醋酸(74:25：1),流速为1.0mL·min-1,检测波长为290 nm,柱温为30℃ ；，进样量20μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备   精密称定靛玉红对照品10.10mg，用甲醇制成浓度为50.50µg·ml-1的溶液，作为对照品溶液①，精密量取对照品溶液①，用甲醇制成浓度为5.05µg·ml-1的溶液，作为对照品溶液②。

 2.2.2 供试品溶液的制备

    取本品10支,混合均匀,精密量取10ml,置50ml容量瓶中, 加甲醇稀释到刻度,摇匀, 滤过，取续滤液，即得。

2.3 标准曲线的绘制

在上述条件色谱下，精密吸取上述对照品溶液②5、10、20、30、50 μl,注入液相色谱仪，测得峰面积。以对照品峰面积为纵座标,以对照品物质的量为横坐标作标准曲线，并以最小二乘法计算得回归方程：Y = 13452 X +3453 ，R²=0.9999靛玉红在0.02525μg～0.2525μg范围内有良好线性关系,；

2.4  精密度试验

取同供试品溶液溶液,连续进样6次,结果靛玉红RSD为0.68%(n=6),。

2.5  稳定性试验取供试品溶液,间隔4 h进样1次,共间隔24h，结果靛玉红RSD为1.01%(n=7)。

2.6 重复性试验

取同一批号样品6份，分别按本法处理后进行测定，结果靛玉红平均含量为 12.11μg·ml^-1,RSD为0.54%(n=6)。

2.7  加样回收试验

   精密量取已知含量的小儿感冒口服液6份，每份5ml，各精密加入2.2.1的对照品溶液①1ml，1ml，2ml，2ml，3ml，3ml置10 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀，按本法进行含量测定并计算回收率 测定结果 见表1

2.8  样品的测定

   精密量取3个批号供试品溶液各2份,按本法制得供试品溶液, 按本法进行含量测定结果 见表2。

3   讨论

3.1  检测波长的的选择: 取对照品溶液①在240-360nm波长范围内扫描，在290nm波长处有最大吸收，故选择290 nm为检测波长。

3.2 靛玉红的含量测定方法有薄层色谱扫描法［2］，本实验采用高效液相色谱法测定靛玉红含量，分析速度快，灵敏度高，专属性强，应用范围广，重现性与准确性均优于薄层色谱扫描法。

 [1]  国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[S].2010.489

［2］ 刘方 余绍玲  薄层扫描法测定青冰散中靛玉红的含量《中成药》 2002，24（12）：662-663.

表1

样品中靛玉红回收率试验结果（n=6）

表2

样品测定结果（n=3）