刘修树¹，陈业仓²

（1.巢湖职业技术学院，安徽 巢湖 238000   2.上海海虹实业（集团）巢湖今辰药业有限公司，安徽 巢湖 238000）

摘要 目的  采用高效液相色谱法测定舒通肩痛片中延胡索乙素的含量。方法  色谱柱为Kromasil C₁₈（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液（60：40）；流速为1ml·min^-1；检测波长280nm。结果  延胡索乙素进样量在8.32～41.60μg/ml之间呈良好的线性关系（r=0.9999）,平均加样回收率为100.11%,RSD为1.04%（n=6）。结论  本方法操作简单、快速，可用于舒通肩痛片的质量控制。

关键词  HPLC；舒通肩痛片；延胡索乙素；含量测定

Determination of Tetrahydropalmatine in shutongjiantong tablets by HPLC

Liu xiushu¹,Chen yecang²

(1. ChaoHu Vcational and Technical College 2.Shanghai Haihong Groub Chaohu C-dragon Pharmacy Co.,ltd.)

Abstract Objective  A method was established for determination the content of Tetrahydropalmatine in shutongjiantong tablets by HPLC. Method  Kromasil C₁₈（250mm×4.6mm，5μm）was used. The mobile phase consisted of methanol-0.1% trifluoroacetic Acid(60:40)as mobile phase;the flow rate being 1.0ml·min^-1;and the detection wavelength at 280nm. Results  The calibration curve was in good linearity within the range of 1.75～28.00μg·ml^-1(r=0.9999),the average recovery was 101.46%(RSD=2.03).Conclusion  The method is simple and rapid,And can be used for the quality control of shutongjiantong tablets.

Key words  HPLC; shutongjiantong tablets; Tetrahydropalmatine; Determination

舒通肩痛片是上海海虹实业（集团）巢湖今辰药业有限公司生产的中药6类新药，由当归、延胡索等中药制备而成的中药复方制剂，具有活血化瘀，行气止痛之功效，用于治疗肩关节周围炎之瘀血阻络症。本品的原质量标准对阿魏酸进了质量控制,为更好的控制该产品的质量，考虑到本品处方中延胡索为主要活性成份之一，本试验采用高效液相色谱法对舒通肩痛片中延胡索乙素进行了含量测定，获得满意效果。

1 仪器和材料

1.1  仪器  Agilent 1200高效液相色谱仪（包括：Agilent G1310A四元泵，Agilent G1322A 真空在线脱气机，Agilent G1314B-VWD紫外检测器，Agilent1200化学工作站）.

1.2  试药  延胡索乙素对照品（中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号110726-200409）；舒通肩痛片由上海海虹实业（集团）巢湖今辰药业有限公司提供；甲醇为色谱纯，三氟乙酸为色谱纯，水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1最佳检测波长的选择

    经查阅文献,延胡索乙素对照品溶液在280nm波长处有最大吸收，中国药典2005年一部中延胡索的含量测定选用280nm作为检测波长，采用本条件于190nm至400nm进行扫描,也表明在280nm波长处有最大吸收，故选择280nm波长作为检测波长。

2.2色谱条件

色谱柱：Kromasil C₁₈（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液（60：40）；流速为1ml·min^-1；T=30℃；检测波长280nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000。

2.3系统适用性试验

  在本色谱条件下，供试品中延胡索乙索成份得到较好的分离，对照品保留时间为13.7min，样品保留时间为13.8min，其色谱峰的保留时间与对照品一致，缺延胡索药材的阴性试样未见延胡索乙素色谱峰。在此色谱条件下，供试品中延胡索乙素能与其他成分较好分离，阴性对照在延胡索乙素峰处无干扰，见图1。

图1 对照品色谱图

图2 样品色谱图

图3 阴性样品色谱图

2.4供试品溶液的制备

   取舒通肩痛片研细粉约1.5g，精密称定，置25ml量瓶中，加入甲醇溶液适量，超声处理20分钟，放冷，加流动相至刻度，摇匀，离心，上清液用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.5线性关系的考察

精密称取60℃干燥至恒重的延胡索乙素对照品，加流动相制成延胡索乙素标准贮备液（0.208mg·ml^-1）。再分别配成0.00832、0.01664、0.02496、0.03328、0.0416mg·ml^-1的系列对照品分别吸取上述溶液20μl，注入5μl定量管的液相色谱仪进样器，测定，分别得到各对照品的峰面积为6.563+04、1.312E+05、1.969E+05、2.625E+05、3.314E+05，以峰面积为纵坐标（Y），对照品浓度（μg·ml^-1）为横坐标（X），绘制标准曲线，得回归方程：Y＝7966.3X-1316；R＝0.9999。表明阿魏酸浓度在8.32～41.60μg·ml^-1之间呈良好的线性关系。

2.6进样精密度试验

   精密吸取中间溶度的对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积，分别为1.969E+05、1.965E+05、1.972E+05、1.970E+05、1.968E+05、1.971E+05，RSD为1.31%，测定结果表明仪器精密度良好。

2.7重复性试验

   取同一批号样品各6份，按上述方法制备，进行测定。延胡索乙素含量分别为0.417、0.422、.0.418、0.415、0.417、0.421平均值为0.418mg·g^-1，RSD为0.61%（n=6），说明使用该法处理样品，重复性较好。

2.8稳定性试验

精密量取同一供试品溶液，分别于0，2，4，8，10h进行测定，对主要色谱峰面积进行考察，RSD为1.17%，结果表明本品在10h内稳定。

2.9加样回收率试验

   取上已测定含量的样品6份，每份约0.3g，精密称定,置于六个10ml的容量瓶中，加入延胡索乙素对照液（0.124g·L^-1）各0.8ml，0.8ml，1.0ml, 1.0ml,1.2ml, 1.2ml，按上述方法制备，进行测定。并计算回收率，结果见表1。

表1 延胡索乙素的加样回收率试验

2.10 耐用性试验  

取同一供试品溶液，用以上试验条件分别使用Kromasil C₁₈（250mm×4.6mm，5μm，08090306）、Kromasil C₁₈（250mm×4.6mm，5μm，08070802）及Lichrospher C₁₈（250mm×4.6mm，5μm，08181115）色谱柱进行测定，结果RSD为1.85%；柱温采用25℃、30℃、35℃三种温度条件注入样品进行检测，结果RSD为1.47%。

2.11样品测定

   取3个批号（090615、090618、090622）的舒通肩痛片样品按上述方法制备，进行测定，分别测定峰面积，按标准曲线法，代入上述回归方程计算样品中延胡索乙素的含量，分别为0.416、0.418 、0.414 mg·g^-1。

3  讨论

对于延胡索中延胡索乙素的分析方法，文献报道的分析方法有酸碱滴定法、比色法、薄层层析结合紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法等 ^[1～6] 。本试验采用高效液相色谱法测定延胡索含量，是目前应用较多的现代分析方法，本法具有快速、准确等优点。针对本制剂处方特点并参考文献报道对流动相进行探索,采用乙腈-酸水系统也能够进行分离,但乙腈价格较贵,且毒性较大,故选择本文中的甲醇-酸水系统,也符合高效液相色谱法试验流动相的首选甲醇-酸水系统的原则。

本制剂处方中延胡索为主要药味，其有效活性成份延胡索乙素易于测定，故将其作为本制剂含量测定指标进行控制，能更好的全面控制该产品质量，此法具有样品处理简单，重复性好，回收率高等，为舒通肩痛片的质量提供了科学实验依据。

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