刘鹃锋¹，曹平良^2a，罗骏^2b，葛郁芝^2c

（1.南昌大学研究生院医学部2007级；2.江西省人民医院 a. 干部保健科；b. 心内一科；c. 心血管研究所，南昌 330006）

摘要：目的 观察水芹水提取液对哇巴因诱发实验性心律失常的影响。方法 将60只SD大鼠随机分成3组，每组20只，即A组：生理盐水对照组（1 mL·kg^-1）、B组：水芹水提取液组（100 mg·kg^-1）、C组：胺碘酮组（100 mg·kg^-1）。通过复制哇巴因诱发的大鼠心律失常模型，观察各组大鼠Ⅱ导联心电图，记录心律失常的出现时间和持续时间，以及各组中出现室早、室速和室颤的大鼠数目，分别计算各组大鼠室早、室速和室颤的发生率，并对心律失常的严重程度通过心律失常评分系统进行定量分析。结果 与生理盐水相比，水芹水提取液能有效推迟大鼠心律失常的开始时间，缩短心律失常的持续时间，降低大鼠室速、室颤的发生率，降低心律失常评分（均P＜0.05）。水芹水提取液与胺碘酮相互比较时，以上各项观察指标差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论 水芹水提取液具有明显的抗哇巴因诱发的实验性心律失常作用，其疗效与胺碘酮注射液相当。

关键词： 水芹水提取液；心律失常；哇巴因；动物实验；大鼠

Effect of Oenanthe Stolonifera(Bl.)DC water extract on experimental arrhythmia induced by ouabain

 Liu Juanfeng¹，Cao Pingliang^2a，Luo Jun^2b，Ge Yuzhi^2c

(1. 2007 Grade of Medical Department of Graduate School, Nanchang University; 2a. Cadre's Health Care Wards. 2b. 1st Cardiovascular Medicine. 2c. Cardiovascular Institute, Jiangxi People’s Hospital, Nanchang, 330006, China)

Abstract  Objective To observe the effect of Oenanthe Stolonifera(Bl.)DC water extract on experimental arrhythmia induced by ouabain in rats. Method 60 SD rats were randomly divided into 3 groups, namely, group A: normal saline control group(1 mL·kg^-1), group B: Oenanthe Stolonifera(Bl.)DC water extract treatment group(100 mg·kg^-1), group C: Amiodarone treatment group(100 mg·kg^-1). By establishing an arrhythmia model induced by ouabain in SD rats, we standard limb lead Ⅱ ECG simultaneously, counted the onset time and duration of arrhythmia, and the number of rats which occured ventricular premature beats(VPB), ventricular tachycardia(VT) and ventricular fibrillation(VF), calculated the occurrence of VPB, VT and VF, quantitative analysis of the severity of arrhythmia by using arrhythmia score system. Result Compared with normal saline, Oenanthe Stolonifera(Bl.)DC water extract and amiodarone could prolong the onset time of arrhythmia, reduce the duration of arrhythmia, decrease the occurrence of VT , VF and the arrhythmia score(all P＜0.05). Each observational item was no significant differences between Oenanthe Stolonifera(Bl.)DC water extract and Amiodarone(all P＞0.05). Conclusion Oenanthe Stolonifera DC water extract has a significantly effect on experimental arrhythmia induced by ouabain in rats, its curative effect equivalents with Amiodarone.

Key words Oenanthe Stolonifera(Bl.)DC water extract; arrhythmia; ouabain; laboratory animal; rats

收稿日期：2010- -

作者简介：刘鹃锋（1983），男，硕士研究生，从事心律失常的研究。

通信作者：曹平良，主任医师，E-mail: cplcpl@public.nc.jx.cn

水芹[Oenanthe Stolonifera(Bl.)DC]为伞形科植物，全草性味甘、辛，性凉，清热利水，主治黄疸性肝炎、水肿^[1]。现代药理研究发现，水芹提取物及其有效成分对心肌缺血再灌注损伤或药物所致的心律失常有明显的对抗作用，其能够显著推迟心律失常动物模型心律失常的出现时间，缩短持续时间，减少心律失常的发生率和死亡率^[2-9]。水芹水提取液由水芹提炼制取，本实验采用哇巴因诱导的大鼠实验性心律失常模型，观察了水芹水提取液的抗心律失常作用，并初步探讨了其作用机制，现将结果报告如下。

1 实验材料

1.1 药品与试剂

水芹水提取液，南京泽朗医药科技有限公司，100 mg·mL^-1；盐酸胺碘酮注射液，杭州赛诺菲安万特民生制药有限公司，75 mg·mL^-1，批号：1408；哇巴因，卫生部药品生物制品检定所，以蒸馏水配成50 μg·mL^-1，批号：870405；10%水合氯醛，江西省人民医院药剂科，批号：20090610。

1.2 实验动物

健康成年SD大鼠60只，雌雄不限，体质量(300±50) g，均购自江西中医学院实验动物中心。动物合格证号：SCXK（赣）2005-0001。

1.3 主要仪器

FX-7102型心电图机（北京福田电子医疗仪器有限公司）；BS400S系列单盘精密天平（德国Sartorius公司）。

2 实验方法

2.1 动物分组

将60只SD大鼠随机分成3组，每组20只，即A组：生理盐水对照组（1 mL·kg^-1）、B组：水芹水提取液大剂量组（100 mg·kg^-1）、C组：胺碘酮组（100 mg·kg^-1）。

2.2 模型制备

参照《现代医学实验动物学》（第一版）^[10]复制大鼠快速性心律失常模型。用10%水合氯醛按300 mg·kg^-1经大鼠腹腔麻醉后，将其置于动物台上并仰位固定。大鼠四肢末端插针形电极, 用心电图机观察并记录Ⅱ导联心电图，如出现心律失常者则弃之。待大鼠心电图稳定后，各组分别于尾静脉注射生理盐水1 mL·kg^-1，水芹水提取液100     mg·kg^-1及胺碘酮注射液100 mg·kg^-1。5 min后各组大鼠于尾静脉注射哇巴因200 μg·kg^-1，10 s内注射完毕，并同步观察Ⅱ导联心电图，记录心律失常的开始时间及持续时间，以及各组中出现室早、室速和室颤的大鼠数目，分别计算各组大鼠室早、室速和室颤的发生率，并对心律失常的严重程度进行定量分析^[11]，在观察时间内，每个心脏取其最严重的一种心律失常相对应的分数作为其心律失常评分（表1）。至注射哇巴因30 min后停止记录心电图。

表1 心律失常评分标准

2.5 统计学方法

所有计量资料均表示为均值±标准差（±S），统计前先对数据进行Levene方差齐性检验，多个样本间均数采用LSD-t检验；等级资料比较采用Kruskal-Willis H检验，如总体上差异有统计学意义，其两两之间比较采用Nemenyi法检验；多个样本率之间的两两比较采用行×列表资料χ²检验，检验水准α=0.05。统计过程由SPSS13.0统计软件包完成。

3 结果

3.1  各组大鼠心律失常开始时间比较

与A组(6.93±2.28 min)比较，B组、C组心律失常开始时间（9.10±3.09 min，9.06±2.88 min）均延迟，差异均有统计学意义（P=0.016，P=0.018）；B组心律失常开始时间较C组延迟，但差异无统计学意义（P=0.962），见表3.1。

表3.1 水芹水提取液对大鼠心律失常开始时间的影响（±S）min

（注 P₁：与A组比较；P₂：与C组比较）

3.2  各组大鼠心律失常持续时间比较

与A组(13.29±4.25 min)比较，B组、C组心律失常持续时间（9.84±3.54 min，9.96±4.39 min）均缩短，差异均有统计学意义（P=0.010，P=0.013）；B组心律失常持续时间较C组缩短，但差异无统计学意义（P=0.927），见表3.2。

表3.2 水芹水提取液对大鼠心律失常持续时间的影响（±S）min

（注 P₁：与A组比较；P₂：与C组比较）

3.3  各组大鼠心律失常发生率比较

各组大鼠均出现室性早搏。B组、C组大鼠室速发生率（50%，45%）分别低于A组（90%），差异均有统计学意义（χ²=7.62，P=0.006；χ²=9.23，P=0.002）；B组与C组差异并无统计学意义（χ²=0.10，P=0.752）。B组、C组大鼠室颤发生率（40%，35%）分别低于A组（80%），差异均有统计学意义（χ²=6.67，P=0.010；χ²=8.29，P=0.004）；B组与C组差异并无统计学意义（χ²=0.11，P=0.744）。其中，A组、B组、C组分别有9只、2只、2只大鼠因室颤而死亡。见表3.3。

表3.3 各组大鼠心律失常发生率的比较

与对照组相比：* P＜0.05

3.4  各组大鼠心律失常评分比较

A组、B组、C组心律失常平均评分分别为（3.65±0.81，2.55±1.36，2.40±1.35）。3组大鼠心律失常评分总体上有差别（P=0.004）。两两之间比较采用Nemenyi法检验得知：A组心律失常评分与B组、C组分别比较时，差异均有统计学意义（χ²=7.02，P=0.030；χ²=9.06，P=0.011）。B组与C组差异无统计学意义（χ²=0.13，P=0.937），见表3.4。

表3.4 各组大鼠心律失常评分比较（±S）

（注  χ₁²、P₁：与A组比较；χ₂²、P₂：与C组比较）

4 讨论

流行病学资料表明：在全球范围内，经临床证实的患有心律失常的人数已达到4000万^[12]，而对于绝大多数心律失常，药物仍是基础和首选的治疗。但药物疗法存在一定的缺陷，包括各类抗心律失常西药总的有效率仅为30-60%；且抗心律失常西药均有不同程度的致心律失常作用^[13]。因此，如何发挥中医药价格低廉、天然、无或低不良反应以及便于长期服用的优势，研究中医药治疗心律失常是当前心律失常研究的一项重大课题。

水芹作为一种传统中药在中医中早已广为应用。在心血管作用方面，水芹煎剂可使离体蟾蜍心脏心率减慢，收缩力减弱，输出量减少。水芹注射液对大鼠整体心脏有抑制作用，并可对抗由乌头碱、氯化钡及氯化钙引起的大鼠心律失常^[2，14]。而水芹甲醇、乙酸乙酯提取物可明显地对抗由心肌缺血再灌注损伤引起的大鼠心律失常，对心肌缺血再灌注损伤有显著的保护作用^[3-6]。水芹乙酸乙酯、正丁醇提取物及有效成分槲皮素对由乌头碱、氯化钡和哇巴因等诱发的大鼠心律失常均有一定的对抗作用，其机制可能与抑制钠、钙内流或促进钙流出，降低心脏快反应细胞的自律性，延长不应期，保护心肌细胞膜上的Na⁺-K⁺-ATP酶功能等有关^[7-9]。

本实验结果显示：与生理盐水相比，水芹水提取液能有效地推迟大鼠心律失常的开始时间，缩短心律失常的持续时间，降低大鼠室速和室颤的发生率，降低心律失常评分（均P＜0.05）；同时减少由室颤导致的死亡例数，这一结果与国内朱慧京^[7]、鲁云鹤^[8]等报道基本一致。表明水芹水提取液具有明显的抗哇巴因诱导的心律失常作用。这主要是由于水芹水提取液中含有乙酸乙酯、正丁醇和槲皮素等多种有效成分，其作为水芹水提取液抗心律失常的物质基础，可从不同方面对心肌细胞起保护作用，达到治疗心律失常的效果。水芹水提取液组与胺碘酮组相互比较时，以上各项观察指标差异均无统计学意义（均P＞0.05），提示水芹水提取液治疗心律失常的疗效可能与胺碘酮相当，究其原因可能主要与水芹水提取液的抗心律失常有效成分较为丰富，其有效成分具有多离子通道靶点作用特性，对离子通道的阻滞作用相对温和等等有关；此外，水芹水提取液有效成分的多靶点作用特性使其可能作用于不同的离子通道，从而产生对离子通道功能紊乱的调节作用。

关于哇巴因诱发心律失常的作用机制较为复杂，主要与其抑制心肌细胞膜上的Na⁺-K⁺-ATP酶活性有关。I_to、I_k1等离子通道的失衡，亦可能是哇巴因诱发心律失常的发生机制之一^[15]。本实验采用哇巴因诱导的心律失常动物模型来研究水芹水提取液抗实验性心律失常的药理作用，其中水芹水提取液显著减少了由哇巴因诱发的心律失常的发生。其作用机制可能是水芹水提取液能够通过提高心律失常大鼠心肌组织的Na⁺-K⁺-ATP酶活性，促进大鼠心律失常模型心肌细胞膜两侧的Na⁺-K⁺-ATP酶转运，调节心肌细胞膜内外Na⁺、K⁺分布，进而影响细胞内Ca²⁺水平，提高Na_ATP通道、K_ATP通道活性，延长APD，维持心肌细胞膜及细胞内Ca²⁺、Mg²⁺的稳态，从而治疗心律失常。此外，水芹水提取液亦可能通过作用于I_to、I_k1对心律失常起到较好的拮抗作用。但水芹水提取液抗心律失常作用的确切机制有待于应用膜片钳等技术进一步研究。

参 考 文 献

[1] 南京中医药大学.中药大辞典.第二版.上海科学技术出版社,2006:715-716.

[2] 姬广聚,曹文斌,黄正明,等.水芹注射剂的抗实验性心律失常作用[J].中国中药杂志,1990,15(7):45-47.

[3] 张红英,金莹,朴惠善,等.水芹甲醇提取物的抗心律失常与抗脂质过氧化作用[J].延边医学院学报,1993,16(2):134-136.

[4] 张红英,朴惠善,李牧子,等.水芹甲醇提取物对大鼠缺血再灌注损伤的保护作用[J].中国中药杂志,1995,20(1):44-46.

[5] 张红英,朱惠京,秦孝智.水芹乙酸乙酯提取物保护大鼠缺血再灌注损伤心肌的作用[J].中国临床康复,2006,10(3):66-68. 

[6] 陈正爱,张红英.水芹乙酸乙酯提取物对大鼠心肌缺血和缺血再灌注损伤的保护作用研究[J].中国药房,2009,20(30):2338-2340. 

[7] 朱慧京,张红英,朴惠善,等.水芹乙酸乙酯提取物抗实验性心律失常作用的实验研究[J].中国中医药科技,1999,6(1):32-33.

[8] 鲁云鹤,郑培芬,张红英,等.水芹正丁醇提取物抗心律失常作用的实验研究[J].中国中医药科技,2002,9(5):292-293.

[9] 张明爽,徐长庆,王秀丽,等.槲皮素抗实验性心律失常作用的研究[J].哈尔滨医科大学学报,2007,41(2):115-117,121.

[10] 施新猷.现代医学实验动物学[M].第一版.人民军医出版社,2000:465-466.

[11] Curtis MJ, Walker MJ. Quantification of arrhythmias using scoring systems: an examination of seven scores an in vivo model of regional myocardial ischaemia[J]. Cardiovasc Res, 1988, 22(9): 656-665.

[12] Cleland JG, Chattopadhyay S, Khand A, et al. Prevalence and Incidence of Arrhythmias and Sudden Death in Heart Failure[J]. Heart Fail Rev. 2002, 7(9): 229-242.

[13] Pleskot M, Babu A, Kajzr J, et al. Characteristics and short-term survival of individuals with out-of-hospital cardiac arrests in the East Bohemian region[J]. Resuscitation. 2006(68): 209-220.

[14] 黄正明.有关中草药水芹现代研究的若干探讨[J].世界华人消化杂志,2001,9(1):1-5.

[15] 龚冬梅,单宏丽,董德利,等.哇巴因诱发大鼠心律失常作用靶点的研究[J].哈尔滨医科大学学报,2002,46(2):87-90.