蒲清荣，杨思进，陈玉兰，赵剑，颜章龙

（泸州医学院附属中医医院  四川  泸州  646000）

摘要：目的  优选神龙贡酒浸提工艺。方法  以浸提物中有效成分淫羊藿苷含量为指标，运用HPLC，使用正交设计法，优选神龙贡酒浸提工艺。结果  神龙贡酒提取工艺为：用55°白酒、常温下、浸泡7天、药材为饮片为最佳。结论  采用该工艺，神龙贡酒提取物中淫羊藿苷的收率最高且稳定。

关键词：正交设计；淫羊藿苷；HPLC；神龙贡酒

Study on extraction process of Shenlong Gongjiu

Pu Qing-rong,Yang Si-jin, Chen Yu-lan,Zhao Jian, Yan Zhang-long

The Hospital of TCM Affiliated Luzhou Medical College, Sichuan Luzhou 646000,China

Abstract：Objective  To optimize extraction of Shenlong Gongjiu. Methods  ariin in extraction  as indicators, using of  HPLC and orthogonal design to optimize the extraction of Shenlong Gongjiu. Results  The extraction process of Shenlong Gongjiu with 55°alcohol liquor, with room temperature ,with seven days ,with decotion pieces of drugs is the best. Conclusion  cariin in the extraction of the Shenlong Gongjiu is high and stable by this extraction process .

Keywords: Orthogonal design; Icariin; HPLC; Shenlong Gongjiu

神龙贡酒处方由西洋参、红花、枸杞子、淫羊藿等药味组成，淫羊藿苷为淫羊藿的主要有效成分，现代药理学研究证实具有保护心血管系统、调节免疫、抗肿瘤、影响内分泌等多种生物活性^[1]。本研究以主要有效成分淫羊藿苷收率为指标，采用正交设计法研究神龙贡酒浸提的最佳工艺条件。

1 仪器与材料

Agilent Technologies 1200 高效液相色谱仪；Agilent C₁₈键合硅胶柱(4.6mm×250mm,5μm)；AP-01P真空泵；Haier BCD-176DA电冰箱；SHH V₂₁型长风三用电热恒温水浴箱；ZK072型电热真空干燥箱；FA1104W电子天平；淫羊藿苷对照品（批号：110737-200312，供含量测定用，中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯，多效蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件：  固定相：Agilent C₁₈键合硅胶柱(4.6mm×250mm,5μm)，流动相：乙腈-水（30:70），流速：1.0 ml·min^－1，温度：25℃，检测波长：270nm。^[2、3]

2.2  浸提工艺优选：以白酒浓度（含醇量）、浸泡时间、浸泡时间、浸泡温度、药材粒度四因素三水平，采用L₉（4）³正交表（见表1），以主要有效成分淫羊藿苷收率为指标，研究浸提法的最佳工艺条件。

表1 水平因素表

2.3 供试品溶液的制备：将浸提液浓缩成干浸膏，置200ml量瓶中，加稀乙醇定容至刻度，超声处理60分钟，精密吸取20ml置100ml量瓶中，加稀乙醇定容至刻度，作为供试品溶液。^[4]

2.4 标准曲线绘制：精密称取淫羊藿苷对照品5.30mg(60℃减压干燥24 h)置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。分别精密吸取对照品贮备液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、7ml于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别注入液相色谱仪。结果淫羊藿苷在21.20μg /ml～148.4μg/ml范围内峰面积A与其质量M呈现良好的线性关系，其回归方程为：A=12.8412M  (R²=0.9998)，n=6。淫羊藿苷对照品色谱图见图1。

图1 淫羊藿苷对照品色谱图

2.5 精密度试验

精密吸取上述淫羊藿苷对照品溶液（0.106mg/ml）10μl，连续进样5次，测定峰面积，结果RSD=0.14%，表明该方法、该仪器测定淫羊藿苷精密度符合要求，见表2。

表2 精密度试验结果

2.6 稳定性试验

精密吸取淫羊藿苷对照品溶液10μl，分别于0，2，4，8，12，24h，注入高效液相色谱仪，测定淫羊藿苷的峰面积，其峰面积的RSD为0.48%，结果表明供试品溶液在24h内稳定。

2.7 重复性试验

取1号实验，按2.3淫羊藿苷的提取工艺制备并测定，结果淫羊藿苷含量RSD=1.02%，符合要求，方法重现性较好。

2.8 加样回收率试验

取1号试验，将浸提液浓缩成干浸膏，置200ml量瓶中，加稀乙醇定容至刻度，超声处理60分钟，精密吸取10ml置100ml量瓶中，加稀乙醇定容至刻度，加入淫羊藿苷对照品(0.1484mg/ml)，测得其平均加样回收率98.76%，表明该方法测定淫羊藿苷的含量是合理的，结果见表3。

表3 加样回收率试验结果

2.9 结果

正交实验结果见表4, 供试品溶液色谱见图2。

表4 正交实验结果

由表可知影响因素由大到小排列是A > D > C >B,提取的最佳方案为A₃B₁C₁D₁，即用55°白酒、常温下、浸泡7天、药材为饮片, 可使神龙贡酒中淫羊藿的提取率达到最高且稳定。

图2 供试品色谱图

2.9 最佳工艺条件验证试验

    根据最佳工艺条件，即用55°白酒、常温下、浸泡7天、药材为饮片,，提取3批神龙贡酒，测得3批样品淫羊藿苷收率分别为56.1μg/g、55.9μg/g、56.3μg/g。

3 讨论

3.1 神龙贡酒处方由我院四川省名中医杨思进教授临床经验方，温肾壮阳，活血通络，补而不滞，对畏寒肢冷，腰膝酸软，头昏耳鸣，性欲减退等症有良好的改善作用，能提高机体免疫力，增强抗病能力。

3.2 根据波长扫描图可知，淫羊藿苷在206nm和270nm波长处均有吸收峰，由于206nm处杂质吸收峰较多，且文献多采用270nm为检测波长，故本实验选择270nm为检测波长。实验结果表明在270nm处检测灵敏度较高，干扰少。

参考文献

[1] 刘雪花.淫羊藿苷药理研究进展.中国现代医生，2009,47（21）：49～50.

[2] 郑鹏成，黄雪峰，韩丽萍.征缴设计法优选补肾壮骨颗粒的制备工艺.中南药学，2009,7（12）：881～884.

[3] 陆彦，奉学敏，邱建永.高效液相色谱法测定化瘀通冠颗粒中淫羊藿苷的含量.药品鉴定，2009,6（11）：47～48.

[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[S].北京：化学工业出版社.2005：212～213.