甘肃张家川县人民医院 王双进
    摘要：免疫检验分析前的质量控制是免疫检验不可忽视的重要因素，同时，也是临床免疫检验工作中容易出现失误的地方。本文主要对临床免疫检验分析前质量控制的过程中要注意的环节进行分析，并针对性提出防范措施，与大家共同商榷。
    关键词：临床免疫；

质量控制免疫检验质量控制工作中，标本的采集、加样前的工作都是临床免疫检验分析前质量控制的主要环节[1]。因此，检验结果的可靠性及准确性与它的过程有着十分紧密的联系。1 采集和保存临床标本血清(浆)是免疫测定的最常用的临床标本，但是有时出于特定的检测目的考量，唾液、脑脊液、尿液、粪便等也可被用作标本。对于保证标本质量来说，标本的采集过程是对其产生影响的重要环节。总体上，下列因素会对标本质量产生影响，即：采集的时间、止血带使用的时间、采血的姿势、抗凝剂及稳定剂的选用等。相比较而言，在收集激素类和治疗药物测定的血清标本时，收集的时间和收集时体位的变化，都会对测定结果产生影响。比如在凌晨4：00～6：00之间，可的松会出现一峰值；而以阵发性方式释放的则有生长激素、促黄体激素、和促卵泡激素，基于此种因素，此类激素在测定时，在紧密相连的时间间隔内采取数份血样本就成为一个必要的选择，选择完毕样本之后，其中间值应该被选取为测定值。还有个例子，即从卧姿变成站姿时，位于血清中的肾素的活性将会呈现明显增高的趋势。再比如检测治疗药物时，抽血检测的时间应根据药代动力学来进行选取服药后的最适时候。而没有时间和体位方面的影响的血清标本的收集主要有肿瘤标志物、特种蛋白和用于传染性病原体的抗原和抗体等。对于抗凝剂的选择，一般是肝素钠负压储血管，但是在用ECLIA来对癌胚抗原CEA进行检测时，如果使用了肝素钠和枸橼酸钠，这二者则会使检测的结果下降大约10％。这一系列的案例都说明，检验人员对影响分析前阶段质量的诸因素的熟悉程度对于整个分析结果的呈现是非常的重要的，同时与临床医生及护理的沟通也是需要进一步的加强的，这些都有助于了解标本的采集情况和后期的质量评价。完成标本的采集工作之后，运输和储存时间也会对检测的结果产生系列影响，因此，需要尽可能的减少运输和储存时间，同时争取在保证质量的前提下尽可能快的处理标本并对进行检测。用电化学发光（ECLIA）免疫测定检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的时候，尤其要引起注意，对其标本的检测应尽可能的在采集后2h内完成，否则位于标本中的红细胞和血小板会在代谢过程中不断地释放NSE，进而使得检测结果要高于实际情形。经过对所做的诸多实验的观察，NSE检测结果与标本放置时间成同向变化，即放置时间的不断延长，会导致NSE检测结果有较大变化，不过如果在2h以内分离血清(浆)，其检测结果虽然也会产生波动，但是波动的幅度在可接受范围之内(<10％)。此外，如果在2～8度的条件下，标本被长时间的保存，IgG则可聚合成多聚体，从而在间接法ELISA的测定中，会导致本底过深，甚至可能进一步的造成假阳性[2]。如果以无菌操作方式分离血清标本，在2度～8度的条件下可以保存1周左右。相反如果以有菌操作的方式对血清标本进行分离，就建议对其进行冷冻保存。如果需要或者想要长时间的保存标本，零下80度的冰箱中成为一个必要的条件。这是因为对标本的反复冻融会对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，进而可能产生假阴性结果，故而需要避免让冻存的标本产生反复的冻融。除此之外，还需要注意的是，在对冻融标本进行混匀的时候，不要通过剧烈振荡的手段达到这一目的，反复颠倒混匀即可。如果在标本中出现了絮状物或混浊物，那么应该首先通过离心沉淀，接下来再取上清进行检测。2 可能影响测定结果的标本因素因为在ELISA测定的标本中含有干扰酶免疫测定，这会导致呈现假阳性或假阴性结果，对这些干扰因素进行分类，则可以划分为两种，一是内源性的，另一是外源性的。2.1 内源性干扰因素属于内源性干扰因素的，一般有高浓度的非特异免疫球蛋白、补体、类风湿因子、因使用鼠抗体治疗或诊断诱导的抗鼠Ig抗体、异嗜性抗体及某些自身抗体、交叉反应物质等等。日常的临床血清(浆)标本中，有相当一部分标本含有不同程度的上述各种干扰物质，这些干扰物质会使得对标本的测定结果呈现为假阳性。为尽可能的避免类风湿因子(RF)对ELISA测定产生干扰，一般情况下都会采用稀释标本的方法来达到这一目的，通过使非特异的RF进行稀释，进而使得其浓度变得非常低，从而实现减小其对测定结果的影响的目的，甚至能够达到几乎不产生干扰，从而提高了相应检验项目结果的可靠性及临床应用的价值。另外还可通过采取改变酶标抗体，预先封闭标本中RF用变性IgG，对抗原进行测定时，可通过在标本中加入能够对RF产生降解作用的还原剂及或酶标二抗使用特异的鸡抗体IgY等措施去除干扰。关于补体的干扰，在临床上最常用以下方法：采用56℃30rain加热，从而使得血清标本中的补体灭活，还可包被或酶标二抗使用特异的鸡抗体，从而使补体系统不会被激活，从而避免了产生假阴性和假阳性的干扰。另外，临床上一般采用封闭抗体、测定前用理化方法将其解离、去除等方法来避免异嗜性抗体、自身抗体、使用鼠抗体治疗或诊断诱导的抗鼠Ig抗体、溶菌酶等干扰物质产生干扰作用。2.2 外源性干扰因素标本溶血、标本被细菌污染、标本储存时间过长和标本凝固不全等均可被看作外源性干扰因素。保证标本质量的重要环节是尽可能的避免标本溶血。而在采血过程中，一些不良习惯的存在和劣质采血器具的使用均容易产生溶血的结果。血红素基团有类似过氧化物的活性，其存在于血红蛋白中。因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如果血红蛋白浓度较高，就易在温育过程中吸附于固相，从而在后面加入HRP的底物时，反应会显色。另据实验观察，如果采用(ECLIA)免疫法进行检测(NSE)，溶血就会对NSE检测结果产生显着的影响。在溶血程度达到lg／LHb这个水平的时候，就会发现NSE的结果呈现显着升高的趋势。NSE检测结果受影响的程度与溶血程度(Hb水平)之间可以看出是呈线性正相关的，如果溶血程度(Hb水平)每增加lg／L，NSE检测结果就会升高15ng／ml一35ng／ml[3]。所以当显性溶血标本在实验室被发现后，应对其予以区分，看其是病理性溶血还是技术性溶血。如果非为体内溶血(病理性溶血)，应将其废弃，并对其作好记录。同时建议予以重新采集血样。如果重新采集血样难以达到，则应该在检验报告中注明“标本溶血”以及此项检验有可能因溶血产生的各种不同影响。2.3 测定前试剂的准备无论是ECLIA免疫测定还是ELISA，试剂的准备也需要引起足够的重视，这在临床免疫测定中是一个不容忽视的因素。如果在实验时才把试剂从冰箱里拿出，那么很有可能使得后面的温育时间不够。进而使得对定性测定的一些弱阳性标本的检测中出现假阴性结果，或者使得定量测定的检测结果偏低。所以，试剂的准备在临床免疫测定中也最为关键。为了尽可能的减少检测的误差，最好在实验开始前20min～30min，从冰箱中把剂盒先拿出，使得其温度平衡至室温状态，而后再进行测定。3结语概而言之，获得准确实验结果需要全面的质量管理作为重要保证。而同时，对整个质量控制会产生重要影响而又容易被人们忽视的一个非常重要的环节就是检验前阶段的质量控制，对于这一点，必须要有予以认真地对待。从患者到实验室分析前，标本会经历众多环节，为了保障检测结果，就要求患者的各种病理及生理情况尽可能的被临床医师所熟知，检验人员及护理人员也应该对各种影响检验的诸因素有一个全面的和系统性的了解，同时在每一个环节上，都应该严格按标准化要求进行规范的操作。这样，才能使得标本的质量和检验结果均有保障。

参考文献

[1]李珩,宾利,梁建群,等.乙肝表面抗原室内质控的失控分析评价[J].国际检验医学杂志,2007,(12).

[2]谢文光,陈文锋,杨媛媛.罗氏电化学发光免疫分析仪专用质量控制与朗道质量控制的比较[J].实用医技杂志,2008,(8).

［3］宋现让，刘美琴。朱传金，等 神经元特异性烯醇化酶检测的标本因素探讨．医学检验与临床．2006。17(4).