【摘要】 地中海贫血(THAC)以地中海沿岸、非洲、东南亚等国家常见。我国主要分部在海南及两广沿海地区。地中海贫血危害严重。重症α地贫可导致死产、死胎严重影响孕妇健康；重症β地贫表现为严重溶血性贫血，肝脾肿大，需要输血维持生命，未成年已夭折。给社会家庭带来沉重负担^[1]。地贫杂合子临床症状轻且可无症状，如果夫妇双方携带，将有1/4生育重症地贫儿的可能，故在地中海贫血高发区开展筛查与诊断非常重要^[2]。诊断方法包括：血液学检测、Hb、MCV、MCH、MCHC、红细胞脆性试验、血红蛋白电泳以及基因芯片技术以及高效液相色谱检测技术。其中血红蛋白电泳在地中海贫血的筛查中起到重要的作用,可将地中海贫血初步分型为α地贫或β地贫及其他异常血红蛋白病，有助于进一步确诊。

[Summary] Thalassemia (THAC) to Mediterranean, Africa, Southeast Asia and other countries. China's main branch in Hainan Province and Guangxi and in coastal areas. Serious Thalassemia. Severe α thalassaemia can cause stillborn foetuses, seriously affect the health of pregnant women; severe β thalassaemia is represented as a severe hemolytic anemia, hepatosplenomegaly, needed a blood transfusion to sustain life, minor has become entrenched. To constitute a heavy burden on society and the family [1]. Thalassaemia gently heterozygous clinical symptoms and can be asymptomatic, if couples carrying, there will be a 1/4-bearing severe thalassaemia infants may, in the Mediterranean area to carry out screening and diagnosis very important ^[2]. Diagnostic methods include: blood tests, Hb, MCV, MCH, MCHC, brittleness hemoglobin electrophoresis experiments, as well as DNA Microarray Technology, as well as high performance liquid chromatography techniques. Where hemoglobin electrophoresis in Thalassemia screening played a significant role in the Mediterranean, a preliminary classification for α and β depleted or meager and other abnormal hemoglobin disorders, helps further confirmed.

【关键词】  地中海贫血，基因芯片技术，珠蛋白链合成

[Keywords] thalassemia, microarray, globin chain synthesis

地中海贫血即分子珠蛋白生成障碍性贫血，其诊断主要依据临床表现、血液学改变、遗传学检查和分子生物学分析四个方面来确定。由于基因调控水平的差异，相同基因突变类型的患者不一定有相同的临床表现；临床血液学改变，除了血液学常规检查外，血红蛋白电泳检查是诊断本病的必备条件，遗传学检查可确定为纯合子、杂合子以及双重杂合子等，相同基因型患者父母基因型组合不尽相同；生物学分析可采用聚合酶链式反应（PCR）技术、等位基因特异的寡核苷酸探针斑点杂交(ASO)和近年来日趋成熟的基因芯片技术等方法进行基因突变型的分析^[3]。通过对婚、育人群的监测得到本地区的地中海贫血不同类型的发病率情况及地贫阳性患者的基因分型。重点诊断地贫基因携带者，区别重型和中间型的诊断。明确查出不被重视的轻型地贫和静止型地贫的基因携带者^[1]。

1、检测方法

1.1 血液学检查：应用全自动血液细胞分析仪检测血红蛋白（Hb）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）及红细胞脆性试验测定。

1.2 应用电泳分析仪（法国希比亚）检测血红蛋白（HbA2）电泳测定 。

1.3 分子生物学分析：采用聚合酶链反应（PCR）技术及基因芯片技术检测。2、诊断标准

2.1  MCV < 79fl 和/或MCH <27pg，则高度怀疑为地贫

2.2  红细胞渗透脆性试验阳性(ROFT < 0.60 ): 即可怀疑为地贫

2.3  HbA2 < 2. 5 % ，则高度怀疑为α地贫基因携带者；阳性为标准α地贫。

2.4  HbA2 >3. 5 %，则为β地贫基因携带者

2.5  地贫诊断基因芯片(Thalachip);地贫基因诊断条膜(反向点杂交)/单管多重PCR技术进行三种常见缺失型α地贫基因分析，ASO寡核苷酸探针点杂交DNA测序^[4]

3、对红细胞脆性试验阳性、血液常规检MCV<79fL、MCH<27pg的孕妇和体检人员做进一步的HbA2电泳测定和基因检测并分型^[5] 
3.1. 重型β海贫  血红蛋白<60g/L，显微镜检查呈小细胞低血色素性贫血，红细胞形态不一、大小不均，有靶形红细胞（10%以上）和红细胞碎片，网织红细胞增多，外周血出现较多有核红细胞。骨髓中红细胞系统极度增生。首诊HbF达30%～90%。HbA明显减少或0，进一步诊断需进行基因分析。
3..2 中间型β地贫 血红蛋白60～100g/L，成熟红细胞形态与重型相似，网织红细胞增多，偶见有核红细胞，HbF>3.5%。符合上述条件者可作出临床诊断，进一步诊断需进行基因分析。中间型β地中海贫血的分子基础较复杂。
3.3 轻型β地贫  血红蛋白稍降低但>100g/L，末梢血中可有少量靶形红细胞，红细胞轻度大小不均。MCV<79fl，MCH<27pg，红细胞脆性试验阳性，HbA2>3.5%或正常，HbF正常或轻度增加（不超过5%）除外其他地中海贫血和缺铁性贫血。
符合上述条件者可作出临床诊断，进一步诊断需进行基因分析。
3.4 静止型β地贫基因携带者  无症状。实验室检查：血红蛋白正常，MCV、MCH和红细胞脆性试验常降低，网织红细胞正常。HbA2>3.5%或正常，HbF正常或轻度增加（不超过5%）确定诊断需做基因分析。

3.5重型α地中海贫血：红细胞中心浅染、形态不一、大小不均，有核红细胞显著增多，靶形红细胞增多。血红蛋白电泳：Hb  Bart’s成分>70%，少量Hb  Portland，可出现微量HbH。符合上述条件者可作出临床诊断，进一步诊断需进行基因分析。
3.6 血红蛋白H病（中间型α地中海贫血）轻度至中度贫血（少数患者血红蛋白可低于60g/L或高于100g/L），红细胞形态基本同重型β地中海贫血所见，红细胞内可见包涵体。骨髓中红细胞系统增生极度活跃。血红蛋白电泳出现HbH区带，HbH成分占5%～30%，也可出现少量Hb Bart’s（出生时Hb Bart’s可达15%以上）。非缺失型血红蛋白H病可出现微量Hb Constant Spring。符合上述条件者可作出临床诊断，进一步诊断需进行基因分析。
3.7轻型α地贫 无症状或有轻度贫血症状，红细胞有轻度形态改变，可见靶形红细胞，血红蛋白稍降低或正常，MCV<79fl，MCH<27pg，红细胞脆性试验阳性，血红蛋白电泳正常。符合上述条件可作出临床初步诊断，确定诊断需做基因分析。
3.8静止型α贫基因携带者  无症状，血红蛋白正常，MCV、MCH和红细胞脆性试验常降低，网织红细胞正常。HbA2>3.5%或正常，HbF正常或轻度增加（不超过5%）。  遗传学：父母一方或双方为β地贫血。β珠蛋白基因突变。

4、无贫血，血红蛋白电泳正常，红细胞形态常正常,少部分可见MCV<79fl，MCH<27pg，红细胞脆性试验阳性。确定诊断需做基因分析^[3]

4.1.重型β地贫血   实验室检查：HbF占10%～90%，其它与国内标准相同。遗传学：双亲均为β珠蛋白生成障碍性贫血。珠蛋白链体外合成速率显示β/α降低至0～0.3；基因分析可测知基因突变类型。

4.2  中间型β地贫  遗传学：父母均为β珠蛋白生成障碍性贫血。珠蛋白链体外合成速率显示β/α降低，基因分析可测知基因突变类型。

4.3  轻型β地贫  遗传学：父母一方或双方为β珠蛋白生成障碍性贫血。基因分析：β珠蛋白基因突变。

4.4  静止型地贫血基因携带者  遗传学：父母一方或双方为β地贫血。β珠蛋白基因突变。

4.5血红蛋白Bart’s胎儿水肿综合征。遗传学：胎儿双亲均为α0珠蛋白基因携带者。基因分析：缺失4个α珠蛋白基因，基因型为（- -/- -）。

4.6  血红蛋白H病  遗传学：父母均有α珠蛋白基因缺陷。珠蛋白链合成速率测定α/β比值<0.5，基因类型分析为（- -/- α）、（- -/ααT）。

4.7 轻型地贫血 出生时Hb Bart’s成分占2%～10%，，血红蛋白电泳正常。遗传学：父母双方或一方有α珠蛋白基因缺陷。基因分析，基因型可为（- -/αα）、（-α/-α）、（-α/ααΤ）、（ααΤ/ααΤ）。

4.2.4 静止型α地贫血基因携带者   遗传学：父母双方或一方有α珠蛋白基因缺矢。出生时Hb Bart’s成分占1%～2%，出生后很快消失。基因型可为（-α/αα）、（ααΤ/αα）。

5、 遗传性胎儿血红蛋白持续存在综合征（HPFH）  临床表现：无贫血，偶见脾肿大。实验室检查：血象基本正常，HbF增加。遗传学：纯合子HbF达100%，杂合子HbF>10%。双亲中有本症突变基因携带者。Gγ/Aγ比率测定和基因分析异常。

参考文献  [1] 血红蛋白与血红蛋白病．张俊武，龙桂芳主编．第1版．南宁：广西科学技术出版社，2003，233-235

[2] 珠蛋白合成异常所致溶血性贫血．张肇和，程少杰.见：邓家栋，杨崇礼，杨天楹，等主编．邓家栋临床血液学．第1版．上海：上海科学技术出版社，2001，578-62

[3] 张新华，周艳洁，李平萍等．广西南宁农村育龄人群地中海贫血筛查及基因型和血液学参数分析．中华流行病学杂志，2006，27（9）769-7

[4] 李春富，何岳林，张玉明等．异基因造血干细胞移植治疗重型β地中海贫血．中华血液学杂志，2003，24（4）174-176

[5] 李明，蔡佩欣，聂李平，等.基因芯片法诊断地中海贫血.中华血液学杂志2003，24(10)551-55