夏伟伟

（济宁医学院附属金乡人民医院检验科，山东 金乡 272200）

[摘要]  目的  探讨乙型肝炎病毒大蛋白（HBV-LP）与HBV复制的关系。 方法  对305例乙肝患者进行HBV血清标志物、HBV-LP、HBV-PreS1和HBV-DNA的测定，并对结果作分析。 结果  HBV-DNA阳性标本中HBV-LP的阳性检出率明显高于HBV-PreS1的阳性检出率（P<0.005）；HBV-LP与HBV-DNA有较高相关性（r =0.948，P<0.005）。 结论  HBV-LP与HBV-DNA呈正相关，较之PreS1，HBV-LP可以更好地反映HBV的复制情况。

[关键词]  HBV-LP；HBV-DNA；HBV-PreS1 

Study on the relationship between hepatitis B virus large protein and HBV infectious  XIA Wei-wei JinXiang Hospital Affiliated to Jining Medical College  272200

[Abstract] Objective To study the relationship between Hepatitis B virus large protein (HBV-LP) and HBV replication. Methods 305 samples with HBV were tested for the presence of serum markers, HBV-LP, HBV-PreS1 and HBV-DNA, and there results were analysed. Results The positive rate of HBV-LP was higher than that of HBV-PreS1 in HBV-DNA positive samples(P<0.005). HBV-LP had a significant correlation with HBV-DNA(r =0.948, P<0.005). Conclusion HBV-LP was positively associated with HBV-DNA, compared with PreS1, HBV-LP can better reflect the replication of HBV.

[Key words]  HBV-LP ；HBV-DNA ；HBV-PreS1

乙型肝炎血清标志物是HBV感染、病程监测及预后评估的主要指标。由preS1基因和preS2基因编码的PreS蛋白是病毒粒子形成所必需的，HBV的嗜肝性主要由PreS与肝细胞受体相互作用介导，PreS与转录激活作用有关^[1]。PreS蛋白与S蛋白共同组成乙型肝炎病毒大蛋白（HBV-LP）。为探讨HBV-LP对乙肝的诊治价值，我们对305例住院及门诊患者的HBV-LP、HBV-M及PreS1-Ag进行检测，并与HBV-DNA的检测结果比较，旨在为乙肝的诊断、监测复制及预后评估提供依据。

1 材料和方法

1.1  材料  选择2012年7月～2012年10月间来金乡县人民医院住院及门诊的305例乙肝患者的血清作为检测标本，另以24例HBV标志物阴性的体检者的血清作为正常对照。 

1.2  仪器与试剂  仪器：芬兰Labsystems Dragon公司的Wellscan MK3全自动酶免分析仪；Roche公司的Light Cycler480荧光定量PCR仪。试剂：HBV M检测试剂由厦门英科新创科技有限公司提供；HBV-LP检测试剂由北京热景生物技术有限公司提供；HBV-PreS1抗原检测试剂由上海复星长征医学科学有限公司提供；HBV-DNA定量检测试剂由上海复星医药集团提供；所有试剂均在有效期内使用。

1.3  检测方法与结果判定  HBV-LP检测采用ELISA双抗体夹心法，定量时用定值标准品0、10、25、50、100、200ng/ml，由全自动酶免分析仪测定结果。HBV M、HBV-PreS1测定均采用ELISA法，定性结果判定均严格按试剂说明操作，由全自动酶免分析仪自动判读。HBV-DNA荧光定量测定采用FQ-PCR，阳性截止值为≥5.0×10²copy·L^-1。

1.4  统计学处理  采用SPSS12.0统计软件包。HBV-LP与HBV-PreS1抗原的检出率比较采用χ²检验；HBV-LP与HBV-DNA检测结果的相关性采用直线相关分析。

2 结果

2.1  HBV血清标志物阴性者的HBV-LP、HBV-PreS1及HBV-DNA的检测

24例HBV血清标志物阴性者的HBV-LP、HBV-PreS1及HBV-DNA的检测结果均为阴性。

2.2  乙型肝炎患者血清HBV-LP及HBV-PreS1抗原的检测

305例HBV-DNA阳性者根据HBV标志物模式的不同分为HBeAg（+）组和HBeAg(-)组，两组HBV-LP及HBV-PreS1抗原的检测结果见表1。

表1  不同HBV标志物模式乙型肝炎患者HBV-LP及HBV-PreS1

抗原阳性检测结果的比较

注：HBV-DNA(+)标本中HBV-LP与HBV-PreS1的阳性检出率比较，χ²=92.83，P<0.005

从表1可见，305例HBV-DNA阳性标本中HBV-LP的阳性检出率明显高于HBV-PreS1的阳性检出率（χ²=92.83，P<0.005）。

2.3  乙肝患者血清HBV-LP与HBV-DNA的检测

将305例HBV-DNA阳性的标本按DNA量的高低分为6组，即10²组、10³组、10⁴组、10⁵组、10⁶组、及≥10⁷组，测定每组标本HBV-LP的OD值，取其平均数，将HBV-DNA取对数作为X轴，HBV-LP OD平均数作为Y轴作散点图，见图1。

图1  HBV-LP与HBV-DNA的关系

注：经直线相关分析r=0.948，P<0.005

由图1可见，随着HBV-DNA含量的增加HBV-LP的OD值也逐渐增加，经直线相关分析二者之间高度相关（r=0.948，P<0.005）。

3 讨论

乙肝病毒包膜蛋白由HBV基因组S区编码，S区分为S基因、preS1基因和preS2基因，可以形成S蛋白(S基因编码)、M蛋白(preS2 + S基因编码)和 L蛋白(preS1+preS2+S 基因编码)。由PreS1蛋白和PreS2蛋白组成的PreS蛋白在病毒感染周期中并不单独出现，而是作为 L蛋白的N端部分存在。L蛋白的PreS部分通过翻译后转位(post-translational translocation)机制以病毒包膜内和外膜外两种拓扑形式存在于包膜上^[2]。L蛋白主要存在于Dane颗粒和管形颗粒表面，与HBV的存在和复制关系密切^[3,4]。乙肝病毒感染者的血清中主要是小球形颗粒，而在病毒复制期血流中则有较多的Dane颗粒和管形颗粒，因此检测血液中的L蛋白，可以较好地反映HBV的复制情况。

结果显示，HBV-DNA阳性标本中HBV-LP的阳性检出率明显高于HBV-PreS1抗原的阳性检出率，二者之间存在显著性差异(P<0.005)。乙肝病毒的L蛋白是构象型蛋白，具有复杂的拓扑结构，只有针对折叠后PreS区构象型表位的特异性单克隆抗体，才能真正捕获到L蛋白的存在。而PreS1蛋白是L蛋白的一部分，无法模拟L蛋白PreS区的复杂拓扑结构，这样获得的单克隆抗体的检测准确率下降，导致临床检测结果并不能反映病毒复制情况。但是有学者报道，HBV-PreS1抗原与HBV-DNA关系密切，不仅可以作为反映病毒复制的标志，而且在某些方面优于HBeAg^[3,5,6,7]。而本实验中PreS1抗原与HBV-DNA的符合率较低（49.5%），远低于HBV-LP与DNA的符合率（80.89%），说明HBV-LP在反映病毒复制上优于PreS1抗原。

HBV-DNA是HBV复制的直接依据。由于HBeAg阳性血清几乎都有HBV-DNA的存在，故认为HBeAg是除外HBV-DNA的一个很重要的复制指标。但随着HBV-DNA检测方法学的进展，发现越来越多的HBeAg阴性的血清中亦存在HBV-DNA，且部分乙肝病人由于前C区末端1896位点的变异导致HBeAg的缺失^[8]，这些使得HBeAg不能很好地反映HBV的复制情况。而本实验表明HBV-LP与HBV-DNA在各种乙型肝炎中都有很高的符合率（分别是93.96%和80.13%），且HBV-LP与HBV-DNA之间存在明显的相关性（r=0.948，P<0.005）。故认为HBV-LP是一个很好的反映HBV复制的指标。

HBV-LP主要在乙肝的急性期出现，其相对含量的消长可以提示乙肝的预后，阴转越早，预后越好。反之，HBV-LP抗原持续阳性则提示感染慢性化和疾病持续活动。对抗病毒治疗的乙型肝炎样本进行HBV-LP抗原的定量分析，可为治疗前的患者筛查和治疗后的疗效判断，尤其对HBeAg(-)的慢性肝炎患者抗病毒治疗的停药时间判断起到重要作用。因此，检测HBV-LP抗原，可以弥补目前血清学指标检测的空白，与基因检测相得益彰。

HBV-DNA PCR检测技术要求精密，所需要的条件高，易发生污染和假阳性，我国卫生资源分配不一，限制了其在中小医院的普遍开展。而HBV-LP的检测不受这些条件的影响，其有效、直接、简便的特点，在各个层次的实验室均可开展，故在中小医院HBV-LP是反映乙肝传染性的很好指标。

参考文献：

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[4]  崔鲂, 胥飚, 陈宏础. 乙型肝炎血清标志物、前S抗原与病毒载量的关系及意义[J]. 江西医学检验, 2004, 22(6):498-500.

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[6]  洪华, 邓军, 张玲英. 乙肝PreS1抗原与HBV-DNA拷贝数的对比研究[J].现代检验医学杂志, 2003 ,10(3):27.

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[8] 朱江, 张树林. HBV前C区A1896变异产生和HBe转换时相的关系[J]. 中华肝脏病杂志, 2000, 8(4):217.