徐 果  陈 雅  杨 征（第三军医大学第三附属医院  重庆  中国400042）

摘 要 目的：建立RP-HPLC法测定金嗓口服液中绿原酸含量的方法。方法：HPLC法，Ultimate（5μm .4.6mm×250mm）为色谱柱，乙腈︰0.5% 磷酸溶液（26︰74）为流动相,检测波长为328 nm,流速为1.0m/min，进样量为5μl。结果：绿原酸测定线性范围为0.105～1.260μg/ml ，范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0.9998）；平均回收率为99.63%,RSD=1.04%(n=7)。结论：该方法准确、简便、专属性强，重复性好，可用于测定金嗓口服液中绿原酸的含量。

关键词：绿原酸；金嗓口服液；高效液相色谱法

金嗓口服液是我院生产的中成药口服液，具有外透风热、内散肺郁、清热解毒以及利咽宣声的作用。适用于风热犯肺结于咽喉所致的声音嘶哑以及急慢性咽喉炎、急慢性扁桃体炎。其主要的成分由金银花、板兰根、黄芩、薄荷、玄参等中药经过复杂的工艺浓缩而成，在相关的标准中只对金银花中的绿原酸有定性的鉴别，而无有效成分的含量测定，并且金银花为比较主要的成分之一，为了更为有效的控制质量以及提高标准故采用高效液相法，测定该复方制剂中绿原酸的含量，方便简便、快速、结果满意。

Content Determination of Chorogenic acid in Jinsang oral liquid by RP-HPLC  

XU guo , CHEN ya , YANG zheng（Institue of Surgery Research,Daping Hospital of Third Military Medial University, Chongqing,400042,China）

ABSTRACT  OBJECTIVE: To establish the method for the content determination of Chorogenic acid in Jinsang oral liquid. METHODS: RP-HPLC method adopted.The determination was performed on Welch UL-C₁₈ column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.5% phosphoric acid(26:74) at the flow rate of 1.0ml/min.The detection wavelength was set at 328nm and The injection volume was 10μl.RESULTS: The linear range of chorogenic acid was 0.105～1.260μg/ml(r=0.9998) with an average recovery of 99.63%(RSD%=1.04% ,n=7).CONCLUSIONl: The method is simple,accurate and specific with good reproducibility and it can be used for the content determination of chorogenic acid in Jinsang oral liquid.          

KEY  WORDS  Jinsang oral liquid; Chorogenic acid;HPLC Content determination

1 仪器与试药

VARIN双泵高效液相色谱仪，prostar 210UV检测器。绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为10753-200413），金嗓口服液（本院自制 批号130113、130227、130308）甲醇为色谱纯（批号为1001743），磷酸（AR 批号110214），水为纯化水。

2色谱条件

Ultimate ODS柱（5μm .4.6mm×250mm）。流动相：乙腈︰0.5% 磷酸溶液（26︰74），流速：1.0ml/min，检测波长328nm^［1.5］，灵敏度1.0AUFS，温度：室温，进样量：10μl。

3检测波长的选择

通过200～800nm波长范围扫描，绿原酸在328nm波长处有最大吸收，故选择328nm为检测波长。

  4  试验方法

         4.1 标准贮备液的配置

精密称取真空干燥的对照品绿原酸约10.50mg用50%甲醇溶解定容至50ml容量瓶，摇匀后作为贮备液。

4.2标准曲线的绘制以及线性关系

     精密量取上述贮备液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml、6.0 ml分别置于10 ml量瓶中，用50%甲醇定容后摇匀，各进样20μL，以峰面积Y为纵坐标，浓度X为横坐标绘制标准曲线，回归方程为：Y=14324219.73X+974813.5，r=0.9998，浓度在0.105～1.260μg/ml范围内线性关系良好。

4.3 精密度试验

     精密吸取浓度为0.105mg/ml的绿原酸对照品溶液10μl，重复进样7次，测定峰面积，RSD=1.04%。

4.4 样品的测定

     精密吸取本样品6ml（先用低温离心机离心3000 r 15min）置50ml棕色容量瓶中。超声处理20min后，加入50%甲醇溶液置刻度用0.45μm的微孔滤膜过滤，精密吸取滤液4.0ml到50ml棕色瓶中加50%甲醇至刻度作为供试品，用外标法计算含量，结果见表1。对照品、样品、阴性、空白色谱图见图1。

 表1 样品测定结果(n=4)

                     Tab 1 Results of content determination of samples(n=4)

                A                           B

             C                           D

                    图1  高效液相色谱图

A 绿原酸对照品  B 不含绿原酸的阴性对照 C 金嗓口服液（供试品）D 空白（溶剂）

Fig 1 HPLC chromatograms

A  substance control  B  negative control    C  test sample  D  blank sample

4.5 重现性试验

   取同批号（130117）的样品5份，照4.4项方法操作测定峰面积。RSD=1.6%。

4.6加样回收试验

精密吸取已测得的绿原酸含量的样品5份（批号：130206 ，浓度为0.02673mg/ml），各1ml到10ml容量瓶，另精密加入绿原酸对照品1ml，按样品测定项下的方法分别测定含量，计算回收率，结果见表2。

                       表2 加样回收率试验结果（n=6）

                       Tab 2 Result of recovery tests(n=6)

     5    讨论

5.1   用RP-HPLC测定金嗓口服液中绿原酸的含量，方法简便、快速、重现性好。在色谱的条件选择中，试验分别比较了0.02mol/L的磷酸二氢钠—甲醇（75:25）调PH3.2与乙腈︰0.5% 磷酸溶液（26︰74）两种流动相，分别采用了同一种ODS C18柱。结果以乙腈︰0.5% 磷酸溶液（26︰74）的流动相在C18柱上获得良好的分离^［6.7］。理论塔板数均在3500以上。 

5.2   供试品溶液的制备过程中采用了2种方法。1、取本品20ml置水浴上蒸干，加入50%甲醇热熔，过滤取滤液6ml（低温离心机离心3000r，15min）置50ml棕色量瓶中加50%甲醇定容至刻度，用0.45μm的微孔滤膜过滤，精密吸取4ml至50ml棕色瓶中，加50%甲醇至刻度作为供试品。2、精密吸取本样品6ml（先用低温离心机离心3000 r 15min）置50ml棕色容量瓶中。超声处理20min后，加入50%甲醇溶液置刻度用0.45μm的微孔滤膜过滤，精密吸取滤液4.0ml到50ml棕色瓶中加50%甲醇至刻度作为供试品。结果显示方法一杂峰很多，相邻峰不容易分开，而方法二相邻峰对住峰无干扰，杂峰明显减少，并且峰型对称。故而选择方法二做为供试品的制备^［8］。

5.3   样品溶液稳定性试验表明，24h内测定，峰面积一致。但是随着放置的天数增加，绿原酸峰面积有减少。

作为院内自制制剂，为了更好保证每一批次的含量一致提高标准为了更好了保证药品的效果，更好的为临床用药服务，认为对含量测定结果应该控制在2.0mg/ml以上。

参考文献

［1］ 国家药典委员会.中国人民共和国药典：一部［S］.2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：205-206.

［2］ 俞秀.RP-HPLC法测定利鼻片中绿原酸的含量［J］.海峡药学，2011,23（2）：46.

［3］ 徐冬，汪涛，张杰.RP-HPLC法测定利鼻片中黄芩苷的含量［J］.中国药师，2010,13（2）:256.

［4］ 聂翠翠，彭家钢，杨瑞芬.高效液相色谱法测定复方芩兰口服液中绿原酸和黄芩苷的含量［J］.湖北中医药大学学报，2011,13（5）：30-32.

［5］桑旭峰，吴海雯，徐奇超.HPLC同时测定银黄口服液中绿原酸和黄芩苷含量［J］.中成药,2005,27(1):96-98.

［6］ 钟小群，蔡庆顺，寒勋衔. HPLC法测定石韦药材中绿原酸的含量［J］.江西中医学学报，2002，14（2）：16-17.

［7］陈桂云，王进洪，丁以华. HPLC测定爽阴药液中绿原酸的含量［J］.中成药，2001（09）：26-27.

［8］国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册［M］.北京:人民卫生出版社，1986:739.