杨爱梅* 李玉兰 

（兰州理工大学生命科学与工程学院，甘肃 兰州 730050）

摘　要: 目的　对藏药甘青虎耳草Saxifraga tangutica全草化学成分进行分离鉴定。方法　利用普通硅胶柱色谱和聚酰胺柱色谱等方法进行分离、纯化,利用超导核磁共振(NMR)、质谱（VG ZAB-HS）等现代波谱技术确定其结构。结果 从甘青虎耳草Saxifraga tangutica的乙醇 (95%) 室温提取物中分离得到5个化合物, 经波谱方法鉴定，其结构被确定为：槲皮素（I），槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷 (II)，槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-7-O-β-D-葡萄糖苷（Ⅲ），β-谷甾醇(IV)，胡萝卜苷(V)。结论 这五种成分均为首次从该种植物中分离得到。

关键词: 虎耳草属；甘青虎耳草；化学成分；分离

中图分类号：O629.61

Isolation and Structural Elucidation of Consitutes from Saxifraga Tangutica 

 YANG Ai-mei  LI Yu-lan

( College of Life and Engineering, Lanzhou University of Technology, Lanzhou, 730050, China)

Abstract: Object  To isolate and identify the consitutes from the whole plant of Saxifraga tangutica, which has been used as traditional herb medicine in the treatment of some diseases. Methods  These compounds were isolated by column Chromatography and their structures were elucidated through spectroscopic analysis (NMR). Results　Five compounds were isolated and identified as:quercetin(I), Hyperoside/quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside (II), quercetin -3-O-β-D-galactoside -7-O-β-D-glu-coside (III),  β-sitosterol(IV), dausterol(V). Conclusion All these compounds were obtained from Saxifraga tangutica first time.

Key words Saxifiaga, Saxifraga tangutica , consitutes, isolate

甘青虎耳草(Saxifraga tangutica)是虎耳草科虎耳草属植物。生于海拔2900- 4900m 的针叶林灌丛下之碎石隙，分布于青海、甘肃、西藏及四川的石渠、色达、壤塘、德格、巴塘等县。甘青虎耳草为常用藏药，藏药名松滴，其味苦性凉，清热，治肝、胆热症和创伤^[1]。同属植物虎耳草还用于治疗急性中耳炎、风热咳嗽，外治大泡性鼓膜炎，风疹瘙痒，有体外抑菌、抗病毒、抗炎和抗肿瘤的药理作用^[2，3]。我们对甘青虎耳草全草化学成分首次进行了研究，从中分离得到5个化合物，其结构被鉴定为：槲皮素（I），槲皮素-3-O-β-D-半乳糖糖苷(II)，槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-7-O-β-D-葡萄糖苷（III)，β-谷甾醇(IV)，胡萝卜苷(V)。这些化合物均为首次从该种植物中分离得到。

1 仪器与材料

XT-4数显微熔点仪；Nicolet Avatar 360 FT-IR型红外光谱仪；Varian INOVA-400MHz核磁共振仪；VG ZAB-HS型质谱仪；柱层析硅胶（200-300目）、薄层层析硅胶（GF₂₅₄）均为青岛海洋化工厂产品。藏药甘青虎耳草购自青海塔尔寺藏医院，植物标本由兰州大学生命科学院张国梁教授鉴定为Saxifraga tangutica，植物标本(2008-01)存于兰州理工大学生命科学与工程学院天然药物研究室。

2 提取与分离

取阴干甘青虎耳草 (4.0kg) 粉碎, 用医用酒精 (95%) 室温浸提3次 (每次7d), 减压浓缩，得到总浸膏400g, 加蒸馏水搅拌悬浮后，分别用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取。减压回收溶剂后得到石油醚浸膏84g, 醋酸乙酯浸膏51g, 正丁醇浸膏64g。

正丁醇部分浸膏64g上大孔吸附树脂柱，分别用水和甲醇洗脱，得除糖后浸膏34g，进行硅胶 (200～300目，500g) 柱色谱分离，湿法上柱，氯仿：甲醇(50∶1，30∶1，20∶1，10∶1，7∶1，5∶1，3∶1，1：1和0∶1)梯度洗脱，每500ml为一流份，等份接样、薄层检测、合并相同部分，得到多个部分（Fr.1~ Fr.3）。Fr.1氯仿：甲醇 (20:1)中析出黄色片状固体，为化合物I的粗品(3.4g)，上硅胶层析柱（70g），氯仿：甲醇 (30:1) 层析后，再上聚酰胺层析柱，甲醇：水 (1:1) 反复层析后得到化合物I的纯品 (118mg)。Fr.2氯仿：甲醇 (5:1)中析出黄色粉末状固体，为化合物II的粗品(2.2g)，上硅胶柱（45g）层析，氯仿：甲醇 (10:1) 层析后，再经甲醇反复重结晶，得到化合物II的纯品 (16mg)。

醋酸乙酯部分浸膏（51g）以硅胶（200-300目，600g）湿法上柱，依次用氯仿：甲醇(50∶1，30∶1，20∶1，10∶1，7∶1，5∶1，3∶1，1：1和0∶1)进行梯度洗脱，每500ml为一流份。TCL检查合并相同组分，其中氯仿：甲醇（5：1）洗脱部分析出化合物III的粗品 (3.6g)，上硅胶层析柱（70g），氯仿：甲醇(10:1)层析后，再上聚酰胺层析柱，甲醇：水 (3:1) 反复层析后得到化合物III的纯品 (32mg)。

石油醚部分浸膏以硅胶(200-300目,1000g) 湿法上柱，依次用石油醚：丙酮(60∶1，40∶1，30∶1，20∶1，10∶1，7∶1，5∶1，3∶1，1：1和0∶1)梯度洗脱，TCL检查合并相同组分，得到多个部分Fr.4~ Fr.5。Fr.4：石油醚：丙酮（30：1）洗脱部分析出化合物IV的粗品 (1.2g)，上硅胶层析柱（25g），石油醚：丙酮(40:1)层析后得到化合物IV的纯品 (15mg)；Fr.5石油醚：丙酮（3：1）洗脱部分析出化合物V的粗品 (0.64g)，经过上硅胶层析柱（12g），石油醚：丙酮(10:1) 层析后，再经丙酮反复重结晶，得到化合物V的纯品 (10mg)。

3 结构鉴定

化合物I:黄色粉末(MeOH),盐酸-镁粉反应呈阳性；EI-MS:m /z(% ):302 [M]⁺(100),286(15),273(7),218(4),159(7), 137(10), 121(6),69(7). ¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:7.66(1H,brs,H-2’), 7.52(1H,d,J=8.0Hz,H-6’), 6.87(1H, d,J=7.6Hz,H-5’), 6.38(1H,s,H-6), 6.17(1H,s,H-8)，5个羟基信号: 12.48(1H,brs,5-OH), 10.80(1H,s,

7-OH),9.61(1H,s,3-OH),9.37(1H,s,4’-OH),9.31(1H,s,3’-OH) 提示化合物Ⅰ具有黄酮骨架。¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ:147.7(C-2),135.7(C-3),175.8(C-4), 160.9

(C-5), 98.2(C-6), 163.9(C-7), 93.3(C-8), 160.7(C-9), 103.9(C-10), 121.9(C-1’), 115.6(C-2’), 145.1(C-3’), 147.7(C-4’), 115.6(C-5’), 120.0(C-6’);以上数据与文献^[4，5]对比，鉴定为槲皮素。

化合物II：黄色粉末(MeOH),盐酸-镁粉反应呈阳性，喷三氯化铝后反应阳性，Molish反应阳性；ESI-MS:m/z 463.4 [M-H]⁺, 485.7 [M-H+Na]⁺.由ESI-MS及¹H-、¹³C-NMR确定分子式为C₂₁H₂₀O₁₂. ¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:7.66 (1H,

dd,J=2.0,8.4Hz, H-6’), 7.51(1H,d,J=2.4Hz, H-2’), 6.80(1H,d,J=8.8Hz,H-5’), 6.40 (1H,d,J=2.0Hz,H-6), 6.19(1H,d, J=2.0Hz, H-8), 5.37(1H, d, J=7.6Hz, H-1”), 3.63 ~3.15 (6H, m, H-2” ~6”), 12.62(1H, 5-OH).¹³C-NMR (100 MHz, DMSO- d₆)δ: 156.3 (C-2), 133.5(C-3), 177.5(C-4), 161.2(C-5), 98.7(C-6),164.2(C-7), 93.5(C-8),156.2 (C-9), 103.9(C-10), 121.1(C-1’), 115.2(C-2’), 144.8 (C-3’), 148.5 (C-4’), 116.0(C-5’), 122.0(C-6’), 101.8(C-1”), 73.2(C-2”), 75.8 (C-3”), 71.2 (C-4”), 67.9 (C-5”), 60.2 (C-6”);根据以上理化性质及光谱数据,对照文献^[6]鉴定该化合物为槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷，即金丝桃苷。

化合物III：黄色粉末(MeOH)，盐酸-镁粉反应阳性，喷三氯化铝反应阳性，Molish反应阳性，IR(KBr)cm^-1 :3 394，1 656，1 608，1 508,提示可能为黄酮类化合物。¹H-NMR(400MHz，DMSO- d₆) δ：7.66(1H, dd,J=2.0,8.4Hz, H-6’), 7.50 (1H,d，J=2.0 Hz,H-2’), 6.81(1H,d,J=8.4Hz,H-5’), 6.38(1H,d,J=1.6Hz, H-6), 6.19 (1H,d,J=2.0Hz, H-8), 5.35(1H, d,J=8.0Hz,H-1” ), 5.20(1H,d,J=6.0Hz, H-1’” ), 12.62(1H, s,5-OH)。¹³C-NMR(100 MHz, DMSO- d₆)δ:156.2(C-2), 133.3(C-3), 177.4(C-4), 161.2(C-5), 99.0(C-6), 162.1(C-7), 94.4(C-8), 156.3(C-9), 104.0(C-10), 121.5(C-1’), 115.2(C-2’), 144.7(C-3’), 148.4(C-4’), 116.2(C-5’), 121.9(C-6’), 101.3(C-1”), 74.1(C-2”), 76.5 (C-3” ), 71.1(C-4”), 67.9 (C-5”), 61.0 (C-6”), 101.8(C-1’”), 73.2(C-2’”), 75.8 (C-3’”), 70.0(C-4’”), 77.4 (C-5’”), 60.1 (C-6’”)。根据以上理化性质及光谱数据,对照文献^[7]鉴定该化合物为槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物IV：白色针晶（氯仿）, mp:136-137℃。5%H₂SO₄乙醇溶液显色为紫红色。经与β-谷甾醇对照品对照，IR完全一致，共薄层为同一斑点，且混合熔点不下降， ¹³C-NMR确定分子式为C₂₉H₅₀O, 根据以上理化性质及光谱数据,对照文献^{[8 ]}鉴定IV为β-谷甾醇。

化合物V：白色粉末(氯仿)，mp>300℃。5%H₂SO₄乙醇溶液显色为紫色。经与胡萝卜苷对照品对照，IR完全一致，共薄层为同一斑点，且混合熔点不下降。根据以上理化性质及光谱数据，对照文献^{[8 ]}鉴定化合物V为胡萝卜苷。

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