甘肃省灵台县疾控中心（744400）  赵红玉  周访渭

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 【择要】目的：研讨以改进的ELISA法检测干血棉球HIV抗体的可行性。方法：用包括20份S/CO比值在1-3在内的100份HIV抗体阳性血清，198份阴性血清样品进行研究，每份血清分为两部分，一部分血清置-20℃；另一部分血清制成干血棉球置37℃储存3周；然后，用干血棉球与血清样品进行HIV抗体检测对比试验。(1) 血清样品按ELISA说明书方法检测，干血棉球用改进ELISA方法检测，结果，干血棉球与相同的血清样品检测结果之间无显著性差异（P＞0.05）。(2)20份37℃储存3周S/CO比值在1-3的HIV抗体弱阳性干血棉球，用ELISA检测，有部分弱阳性样品出现了假阴性结果，而用改进ELISA法检测，全部阳性。结论：可用干血棉球代替血清样品，用改进ELISA法进行HIV抗体检测。

【关键词】ELISA  改进ELISA  干血棉球  医用脱脂棉球  HIV抗体

目前我国HIV抗体筛查实验室都采用血清样品检测HIV抗体，而血清在常温下存放容易变质；虽然用滤纸干血斑便于储存和运输，但因样品载量小（每个滤纸片载体仅容纳50-100ul血清），其应用范围受到限制。选择何种载体既具有较大的样品载量，以便进行多项目检测，又便于在常温下储存和运输；又用何种方法检测这种特殊载体HIV抗体，这是本文要研讨的两个问题问题。脱脂绵柔软膨松，吸水性极强，是血清样品的最佳载体。将血清滴于干绵球上制成干血棉球，具有较大的血清容量（每克绵球可吸纳约200-400ul血清），储存和运输都比较方便，而且样品的前处理也非常容易。为研讨干血棉球代替血清样品检测HIV抗体的可行性，笔者用ELISA法对298份干血棉球与相同血清样品进行了实验对比。为弥补干血绵球处于较高温度、储存较长时间可能会引起HIV抗体阳性样品OD值降低，导致弱阳性出现假阴性结果，本实验又对检测干血绵球HIV抗体的ELISA法进行了改进，以提高检测方法的灵敏度。

1. 材料与方法

1.1样品来源：HIV抗体阳性样品来自本县随访管理的艾滋病病人、HIV感染者及用HIV抗体阴性血清稀释HIV抗体阳性血清制成的弱阳性样品，共100份，其中S/CO比值在1-3的弱阳性样品20份；HIV抗体阴性样品来自自愿咨询检测及公共场所从业人员，共198份。

1.1.1血清样品制备：采集静脉血5-10ml，室温放置2h，自然凝固后3000r/min离心15min分离血清，置-20℃保存使用。

1.1.2干血绵球

1.1.2.1器材（图1）:干血棉球，在具有圆形凹槽塑料膜一面，固定一个或几个适当大小的医用脱脂棉球作为血清样品的载体，在纸壳板的另一面可注明样品来源、检测目的、采血日期等项目。

1.1.2.2制备：将血清样品200ul滴于1个棉球载体上，每份血清可滴于1至数个棉球载体，37℃干燥过夜，干燥器干燥后后置密封袋中，即为干血棉球。37℃储存3周。

1.2试剂：珠海丽珠试剂股份有限公司，ELISA法检测HIV-1/ HIV-2抗体试剂。批号为：2010040708，有效期：20110308。

1.3仪器：美国产Stat Fax 2100型全自动酶标分析仪。

1.4方法：

1.4.1按试剂盒说明书操作。采用450/630nm双波长，不设空白对照。结果以说明书给定参考值设置的酶标仪判断结果为准。

1.4.2干血棉球：取含有200μl血清样品的干血棉球置于试管中，加生理盐水200μl，混匀，溶解20-30min，溶液备用。

1.4.3 改进ELISA：在ELISA中，第一步加入阴性、阳性对照，待检样品由50μl改为100μl，温育时间由30min改为60min；其他步骤和试剂用量同试剂说明书。

1.4.4 20份37℃储存3周S/CO比值在1-3的弱阳性血清，按ELISA说明书和改进ELISA两种方法检测。

2.结果

2.1 298份血清样品用ELISA试剂盒说明书方法检测，HIV抗体阳性100份；经37℃储存3周的298份相同血清的干血棉球，用改进ELISA方法检测，HIV抗体阳性99份。两种样品HIV抗体检测结果符合率99.0 %，经统计学分析，相同的血清干血棉球与血清样品检测结果之间无显著性差异（P＞0.05）（见表1）。

表1  用改进方法检测干血棉球与用说明书方法检测

相同血清样品HIV抗体结果比较

2.2  20份S/CO值在1-3的HIV抗体弱阳性样品，其37℃储存3周的干血棉球用ELISA法检测，HIV抗体阳性11份，而用改进ELISA检测，HIV抗体阳性20份。说明用ELISA法检测37℃储存3周的干血棉球，有部分弱阳性样品出现了假阴性结果，而用ELISA改进方法检测结果均为阳性，和血清抗体阳性结果符合率100%，（见表2）。

表2  用20份HIV抗体弱阳性干血棉球用ELISA检测与

用说明书方法检测结果比较

3.结论

3.1干血棉球在37℃储存3周，用改进ELISA检测HIV抗体，与相同血清样品按说明书操作，检测结果比较，两种样品HIV抗体检测结果符合率99%，统计分析，无显著性差异（P＞0.05）；干血棉球集合了血清样品和滤纸片样品二者的有点，既有容量大，有易于储存和运输等优点。可用干血棉球代替血清样品用于HIV抗体的检测。

3.2 37℃储存3周的干血棉球，会引起HIV抗体活性降低，HIV抗体弱阳性样品，按ELISA检测，会出现假阴性结果；但通过对ELISA方法稍作改进，即增加待检样品量，同时延长抗原-抗体反应（温育）时间，可避面这一现象。用改进ELISA检测干血棉球与相同血清样品按试剂说明书操作，检测结果比较，二者符合率为100%，经统计学分析，无显著性差异（P＞0.05）；改进ELISA在实验原理、操作步骤与试剂盒说明书完全相同。可用改进ELISA检测干血棉球HIV抗体。